尊龙凯时推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具有以下显著特点：

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板，便可快速开始实验。

2. 经过优化的引物等组分，确保高灵敏度。

3. 提供阳性对照，有助于区分假阴性样品，提升检测准确性。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. 进行定性及定量检测均可，定量检测线性范围至少达到五个数量级。

6. 本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 本产品专为科研用途设计。

使用方法

一、DNA提取

使用任意自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为避免污染，阳性对照的稀释操作必须在独立区域进行。具体操作如下：

1. 标记六个离心管，分别为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个管中依次添加45μL的DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（1×10⁸拷贝/μL)，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放入冰上待用。
4. 循环执行稀释步骤，直到获得六个浓度的标准曲线样品。
5. 如不需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

三、试剂配制

根据待检测样品数量准备相应数量的qPCR管，向各PCR管中加入必需的成分，详细信息可参考说明书。

四、添加模板

向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于扩增仪器中，按照设定的扩增程序进行操作。

六、结果分析

1. 如果制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样品DNA浓度。
2. 未制作标准曲线时，阳性对照的Ct值应小于30，呈现典型的S型曲线；阴性对照Ct值为38或无Ct值。样本Ct值小于35表示阳性，Ct值在35-38之间需复检，重复实验后如Ct值仍在该范围内且有明显指数增长，则判定为阳性，反之则为阴性。

尊龙凯时的产品需低温运输，建议在-20℃保存，保质期为一年。阳性对照务必单独放置，避免与其他试剂污染。