尊龙凯时质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验准备

一、实验准备内容

在进行赖氨酰肽链内切酶实验前，应确保所有实验材料和设备已准备齐全。特别是要使用尊龙凯时提供的高品质质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061，以保证实验结果的可靠性。

二、酰胺酶单位定义

酰胺酶单位的定义为在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺的酶量。计算公式如下：AU/vial=[(a-b)/25] × (1/962) × (40/01)，其中a表示检测样品的吸光度，b表示空白对照的吸光度。

三、实验操作流程

1. 使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管端，以防止捕获任何蛋白。
2. 应用于质谱分析的凝胶染色试剂盒，如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。
3. 进行蛋白质样品的电泳分离。
4. 从凝胶中切割蛋白质片段并放入微量离心管中。
5. 对凝胶进行脱色（可使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液）。
6. 向试管中加入300μL乙腈，并搅拌30分钟。
7. 去除乙腈，用Parafilm膜覆盖微量离心管。
8. 在Parafilm膜上打孔，进行真空干燥15分钟。
9. 用100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，在56℃恒温1小时。
10. 室温冷却后，加入等量的50mM碘乙酰胺溶解于100mmol/L碳酸氢铵，在暗处恒温45分钟并涡旋。
11. 使用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
12. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
13. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵使凝胶片段膨胀15分钟。
14. 再次用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
15. 去除液相，进行真空干燥凝胶片段15分钟。
16. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中湿润凝胶片段45分钟。
17. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段置于37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5环境中过夜。
18. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，振荡凝胶片段进行三次抽提多肽，时间20分钟。
19. 加入5%甲酸/50%乙腈，再次进行了三次抽提多肽。
20. 如有需要，使用SpeedVac浓缩多肽。
21. 采用ZipTip脱盐和纯化多肽。
22. 如需要，将多肽用弱真空浓缩至2μL。
23. 最后，加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

通过尊龙凯时官方代理——北京百奥创新科技有限公司，可以方便地购买尊龙凯时质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等高品质产品，欢迎随时咨询！