在生物医学研究领域，如何有效控制病毒载体的感染剂量，以确保一个靶点仅进入单个细胞，一直以来都是科研人员面临的挑战。无论是针对体外难以感染的细胞构建慢病毒文库，还是在体内应用AAV文库，找到最佳的感染剂量至关重要。文库实验旨在探明单基因引发的功能变化，因此，必须确保每个细胞只能接收到一个靶点的病毒。

在进行细胞实验时，尤其是文库筛选，可以通过对照病毒进行预实验来摸索最佳MOI（感染效率达到80%的MOI）。推荐的文库操作MOI设置为最佳MOI的三分之一，这样可以显著减少病毒的用量，从而降低同一细胞内的病毒重复感染几率。然而，对于一些难以感染的细胞，如免疫细胞，或是在体内实验中，如何确定最佳剂量以确保一个靶点只进入一个细胞，仍旧是一个棘手的问题。

为了解决这一问题，尊龙凯时推出了三色荧光（mTagBFP、Venus、mCherry）病毒，这为研究人员提供了一种更为有效的文库感染预实验工具。三色荧光病毒包括慢病毒和AAV两种类型，能够帮助科研人员在不同剂量下进行细致的感染实验。

根据文献《Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq》，为评估AAV在低感染复数下进行广泛感染的可能性，研究者进行了体内滴定实验。该实验准备了三种不同剂量的AAV，分别为25E9、5E9和5E10个颗粒，并应用phpb血清型。病毒构建方案在CBh启动子的控制下独立表达mTagBFP、Venus和mCherry。通过流式细胞仪筛选，可以确定一个较低的剂量，从而有效降低同一细胞感染双病毒的几率。最终选择5E9作为最佳剂量，因为这一剂量能够最大化单个AAV感染细胞的数量。

在线上实验方面，研究人员通过将三种AAV的等比例混合物注射到不同剂量的LSL-Cas9模型动物中（低剂量25E9，中剂量50E9，高剂量25E10），观察各个病毒剂量对细胞核感染百分比的影响。记录结果显示，注射50E9 AAV颗粒四周后的脑细胞荧光成像，能够清晰展示GFP的表达情况。

无论是在细胞实验还是动物实验中，尊龙凯时的三色荧光病毒都可用于进行相关预实验。研究人员可以根据慢病毒感染操作手册或动物注射文献，设置不同剂量进行细胞的感染，或在小鼠体内进行剂量注射。在不同剂量下，通过流式细胞分析转染效率和单荧光细胞比例，比较不同实验条件下病毒的感染效果，从而选取单病毒感染比例最高且感染细胞数量最多的剂量作为最佳实验剂量。

【参考文献】Santinha, A.J., Klingler, E., Kuhn, M. et al. Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq. Nature 622, 367–375 (2023)